人血小板堿性蛋白(PBP/CXCL7)ELISA試劑盒說明書的詳細(xì)資料:
人血小板堿性蛋白(PBP/CXCL7)ELISA試劑盒組成:
1 30 倍濃縮洗滌液20ml×1 瓶7 終止液6ml×1 瓶
2 酶標(biāo)試劑6ml×1 瓶8 標(biāo)準(zhǔn)品(32μg/L) 0.5ml×1 瓶
3 酶標(biāo)包被板12 孔×8 條9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液6ml×1 瓶10 說明書1 份
5 顯色劑A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 張
6 顯色劑B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 個
標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
16μg/L 5 號標(biāo)準(zhǔn)品150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
8μg/L 4 號標(biāo)準(zhǔn)品150μl 的5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
4μg/L 3 號標(biāo)準(zhǔn)品150μl 的4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2μg/L 2 號標(biāo)準(zhǔn)品150μl 的3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.0μg/L 1 號標(biāo)準(zhǔn)品150μl 的2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,
然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡
量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此
重復(fù)5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應(yīng)在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進行。
操作程序總結(jié):
計算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的
OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),
即為樣品的實際濃度。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未
用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD 值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴(yán)格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 個月
產(chǎn)品相關(guān)關(guān)鍵字: 人血小板堿性蛋白ELISA試劑盒 PBP/CXCL7 人CD28elisa試劑盒 elisa試劑盒