MTT 溶液(5mg/ml)

產(chǎn)品簡介： 

    MTT 比色法是一種檢測細胞存活和生長的方法。 MTT 細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的檢測。 MTT 檢測原理在于活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性 MTT 還原為水不溶性的藍紫色 Formazan 并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。 在特定溶劑 (如 DMSO)存在的情況下，可以被*溶解。然后通過酶標儀可以測定 570nm 波長附近的吸光度。細胞增殖越多越快，則吸光度越高；細胞毒性越大，則吸光度越低。 

產(chǎn)品組成： 

自備材料： 

1、 細胞培養(yǎng)液 

2、 胰蛋白酶消化液 

3、 低速離心機 

4、 96 孔培養(yǎng)板 

5、 細胞計數(shù)板或計數(shù)器 

6、 DMSO 或 Formazan solvent 

7、 搖床 

8、 顯微鏡 

9、 酶聯(lián)免疫檢測儀 

操作步驟(僅供參考)： 

1、 細胞用含血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)至對數(shù)生長期， 常規(guī)胰蛋白酶消化液消化細胞(懸浮細胞無需

    消化)。 

2、 低速離心，收集細胞沉淀。 

3、 用培養(yǎng)液重懸細胞沉淀，制備成單細胞懸液，并計數(shù)。 

4、 細胞接種于 96 孔培養(yǎng)板，一般接種密度為 3000～10000 /孔。通常細胞增殖實驗每孔

    加 3000 個細胞，細胞毒性實驗每孔加入 6000 個細胞即可。具體每孔所用的細胞的數(shù)

    目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定。 

5、 37℃ 5%CO2 繼續(xù)培養(yǎng)或按照實驗具體需要進行培養(yǎng)，一般培養(yǎng) 6～24h。 

6、 按照實驗具體要求，給予 0～20ml 干預藥物處理，37℃ 5%CO2 繼續(xù)培養(yǎng)至合適時間。 

7、 棄培養(yǎng)液，每孔加入 10ml MTT solution 和 100ml 新鮮培養(yǎng)液，在細胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)

    孵育 4h。 

8、 棄培養(yǎng)液，每孔加入 110ml DMSO，置搖床上低速振蕩 10 min，使結晶物充分溶解 。

8、 棄培養(yǎng)液，每孔加入 110ml DMSO，置搖床上低速振蕩 10 min，使結晶物充分溶解 。

    如果紫色結晶較小或較少，溶解的時間會短一些。如果紫色結晶較大或較多，溶解的時

    間會長一些。 

9、 在酶聯(lián)免疫檢測儀 570nm 測定 各孔吸光度。 

注意事項： 

1、 MTT solution(5mg/ml)盡量減少反復凍融的次數(shù)，以免失效 ，當顏色變?yōu)榛揖G色時，

     請勿使用。 

2、 由于使用 96 孔板進行檢測，如果細胞培養(yǎng)時間較長，應注意蒸發(fā)問題。 

3、 MTT solution 在低溫情況下會凝固，使用前請置于室溫或 20～25℃水浴至全部融解

      后使用。 

4、 觀察 formazan 是否*溶解，亦可以借助 光學顯微鏡觀察。 

5、 培養(yǎng)細胞時盡量細菌避免污染。 

6、 應注意設立 OD 調(diào)零孔和對照。 

7、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。 

有效期： 12 個月有效。