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遠慕實驗:常用電泳法介紹
點擊次數(shù):353 更新時間:2022-06-16

 1、醋酸纖維素薄膜電泳(電泳法測定)
醋酸纖維素是提纖維素的羥基乙酰化形成的纖維素醋酸酯。由該物質(zhì)制成的薄膜稱為醋酸纖維素薄膜。電泳時經(jīng)過膜的預處理、加樣、電泳、染色、脫色與透明即可得到滿意的分離效果。此電泳特點是分離速度快、電泳時間短、樣品用量少。因此特別適合于病理情況下微量異常蛋白的檢測。

2、紙電泳
紙電泳(PE)是指用濾紙作為支持載體的電泳方法。是zui早使用的區(qū)帶電泳,由于操作簡單方便,因此在很多領(lǐng)域得以廣泛應(yīng)用。比如,分離、確定某些蛋白質(zhì),如糖蛋白、脂蛋白等,尤其是在分離氨基酸的混合物時,PE是一種很有價值的分析技術(shù)。在這種平臥式濾紙電泳裝置(見圖6-2)中,將濾紙條水平地架設(shè)在兩個裝有緩沖溶液的容器之間,樣品點于濾紙中央。當濾紙條被緩沖液潤濕后,再蓋上絕緣密封罩,即可由電泳電源輸入直流電壓(100V~1000V)進行電泳。

3、凝膠電泳
由區(qū)帶電泳中派生出一種用凝膠物質(zhì)作支持物進行電泳的方式,被稱為凝膠電泳。因此,該凝膠適合于免疫復合物、核酸與核蛋白的分離、鑒定及純化。在臨床生化檢驗中常用于LDH、CK等同工酶的檢測。

4、等電聚焦電泳
等電聚焦電泳是20世紀60年代中期問世的,一種利用有pH值梯度的介質(zhì),分離等電點不同的蛋白質(zhì)的電泳技術(shù)。因為這種電泳方法具有很高的分辨率,所以在等電點上只要有0.01pH單位的差異就能被滿意地分離。因此,特別適合于分離分子量相近而等電點不同的蛋白質(zhì)組分。 
    
等電聚焦電泳法的特點: 
①使用兩性載體電解質(zhì),在電極之間形成穩(wěn)定、連續(xù)、線性的pH梯度;
②由于“聚焦效應(yīng)",即使很小的樣品也能獲得清晰、鮮明的區(qū)帶界面;
③電泳速度快;
④分辨率高;
⑤加入樣品的位置可任意選擇;
⑥可用于測定蛋白質(zhì)類物質(zhì)的等電點;
⑦適用于中、大分子量(如蛋白質(zhì)、肽類、同工酶等)生物組分的分離分析。

5、等速電泳 
等速電泳(CITP)是一種“移動界面"電泳技術(shù)。是電泳中惟一的分離組份與電解質(zhì)一起向前移動,同時進行分離的電泳方法。同等電聚焦電泳一樣,等速電泳在毛細管中的電滲流為零,它采用兩種不同濃度的電解質(zhì)組成,一種為前導電解質(zhì),充滿整個毛細管柱;另一種為尾隨電解質(zhì),置于一端的電泳槽中。圖6-3是陰離子等速電泳示意圖。CITP適用于小離子、小分子、肽類及蛋白質(zhì)的分離。

6 、雙向凝膠電泳(二維電泳)
雙向凝膠電泳(two-dimensional gel electrophoresis, 2-DE)技術(shù)又稱二維凝膠電泳技術(shù),是目前常用的*一種能夠連續(xù)地在一塊膠上分離數(shù)千種蛋白質(zhì)的方法,*向采用等電聚集電泳。第二向采用了十二烷基硫酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳。廣泛應(yīng)用于生物學研究的各個領(lǐng)域,其原理是將高分辨率的等電聚集電泳和SDS-PAGE電泳聯(lián)合組成雙向電泳。

7、免疫電泳
免役電泳是電泳分析與沉淀反應(yīng)的結(jié)合產(chǎn)物。該技術(shù)有兩大優(yōu)點:一是加快了沉淀反應(yīng)的速度,二是將某些蛋白組分跟據(jù)其帶電荷的不同而將其分開,再與抗體起反應(yīng),從而使本法更為微量化、多樣化。因此,其應(yīng)用范圍日益擴大。
該方法可以用來研究:
①抗原和抗體的相對應(yīng)性;
②測定樣品的各成分以及它們的電泳遷移率;
③根據(jù)蛋白質(zhì)的電泳遷移率,免疫特性及其它特性,可以確定該復合物中含有某種蛋白質(zhì);
④鑒定抗原或抗體的純度。

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