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如何選擇合適的全血DNA、RNA提取方法?
點(diǎn)擊次數(shù):375 更新時(shí)間:2022-10-14

  從全血中提取DNA和RNA應(yīng)該說是最基本的工作了,提取的DNA和RNA質(zhì)量的好壞直接影響了下游的實(shí)驗(yàn)和分析,可供選擇的方法非常多,亂花漸欲迷人眼,如何選擇最/適合的方法,成了很多人實(shí)驗(yàn)開始前最難以抉擇的事情。遠(yuǎn)慕生物從兩個(gè)方面,層層剝繭,分析最佳的實(shí)驗(yàn)方法。

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  1、 全血的采集保存和DNA的提取

  a、 用含抗凝劑的采血管進(jìn)行采血,抗凝劑一般有EDTA和肝素,EDTA更好一些,不會(huì)影響下游的反應(yīng),如果沒有采血管,也可以自己添加抗凝劑EDTA,提前準(zhǔn)備0.04M的EDTA溶液,每5ml的血液中加入0.4ml配好的EDTA溶液,顛倒混勻即可。保存于-20℃至-80℃,一般2-3年內(nèi)均可以提取,保存時(shí)間越短,提取的質(zhì)量越高,最好在2個(gè)月內(nèi)提取。

  b、 DNA提取方法的選擇:全血提取試劑盒一般有離心柱和溶液型兩種(比如Qiagen、Promega、Bioteke;摒棄酚氯仿手提的方法,時(shí)間長毒性大),原理及步驟基本相同。雖然各公司推出了N多型號(hào),讓人不知如何去選擇,但從原理和操作步驟看,基本就是離心柱和溶液型兩種。一般來說,離心柱的提取純度高一些,但是處理量?。?.1-1ml)、得率略低;溶液型的提取量大(1-10ml)得率也高于離心柱。醫(yī)院的血液標(biāo)本一般在2ml以上,一般選擇溶液型的方法提取.在說到國產(chǎn)和進(jìn)口差別的時(shí)候,很多人以為進(jìn)口一定比國產(chǎn)的好,我們覺得沒有最好,只有更好!

  c、 非抗凝血(凝固血)能否提取?答案是肯定的,而且一點(diǎn)都不麻煩,提取效果和抗凝血沒有差別!在你找遍了進(jìn)口的所有品牌都找不到后,回過頭來您才發(fā)現(xiàn)原來他就在身邊,遠(yuǎn)慕的凝固血基因組DNA提取試劑盒已經(jīng)有很多忠實(shí)的用戶。

  2、 全血RNA如何提取

  a、 全血RNA提取過程哪些是RNA降解的因素?

  全血中RNA酶是非常豐富的,RNA在沒有保護(hù)的狀態(tài)下很容易降解!哪些是狀態(tài)RNA不受保護(hù)呢,比如紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞的過程,紅細(xì)胞裂解液是低濃度的平衡鹽/溶液,沒有抑制RNase的成份,這時(shí)候RNA不受保護(hù);DNA酶消化的時(shí)候RNA也不受保護(hù),這個(gè)時(shí)候也沒有抑制RNase的成份。

  b、 什么樣的提取方法更好?

  我們在選擇方法的時(shí)候要傾向于對RNA全程有保護(hù)的方法!一般的方法都是先用紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞,然后從白細(xì)胞提取核酸,還要經(jīng)過DNA酶的消化去除DNA,這種并不是最/好的方法,過程中有很多RNA降解的因素。所以直接裂解法是最/好的方法,將采集的血液迅速加入3倍體積的裂解液血液(液體樣本)總RNA快速提取試劑盒(離心柱型)的裂解液,迅速顛倒混勻。裂解液RLS含有強(qiáng)烈的蛋白變性劑,能迅速變性蛋白,是RNase變性,不能對RNA降解。裂解后的混合液還可以用來運(yùn)輸,以避免RNA降解。

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