瓊脂糖凝膠電泳是利用DNA、RNA分子帶負(fù)電荷磷酸基團(tuán)的特性，通過(guò)電流使得片段大小不同的核酸由負(fù)極的凝膠孔中緩慢向正極移動(dòng)，最終達(dá)到分離核酸分子的技術(shù)。由于分子量小的核酸片段在凝膠中移動(dòng)速度較快，分子量大的核酸片段移動(dòng)相對(duì)較慢的特點(diǎn)，就可以將分子量不同的核酸片段區(qū)分開(kāi)，再結(jié)合DNA Marker，即DNA分子量固定已知的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行分析，就可以準(zhǔn)確識(shí)別和判斷核酸片段大小，也就是跑出來(lái)的“小東西"到底是不是我們想要的目的基因。

瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)目前在生物學(xué)科中有非常廣泛的應(yīng)用，但是在這個(gè)過(guò)程中有幾點(diǎn)小細(xì)節(jié)還需要我們多多注意哦：

①瓊脂糖凝膠制備。在制備之前，我們首先要確定瓊脂糖凝膠濃度，當(dāng)我們需要跑小片段核酸時(shí)，就需要制備濃度較高的瓊脂糖凝膠，這樣DNA片段跑起來(lái)的阻力變大，速度變慢，反之亦然。通常情況下，瓊脂糖凝膠的濃度在1%左右，即1克瓊脂糖與100毫升電泳緩沖液混勻制成，二者體積總和不要超過(guò)錐形瓶的三分之一。搖晃混勻后用微波爐加熱到微沸狀態(tài)，搖勻后繼續(xù)加熱至微沸狀態(tài)，再次搖勻，反復(fù)多次，直至溶液變的清澈明亮。避免溶液暴沸的情況出現(xiàn)，以免影響跑膠效果。冷水沖洗瓶壁略微降溫后添加適量核酸染料，搖勻倒入插入梳子的模具中，等待30-60 min凝膠完/全凝固即可，盡量在3小時(shí)內(nèi)使用完畢。

②樣品準(zhǔn)備。樣品在從PCR儀中取出后不要急于點(diǎn)樣，因?yàn)闃悠穭側(cè)〕鰰r(shí)管內(nèi)液體和氣體溫度很高，非常活躍，馬上開(kāi)蓋會(huì)造成擴(kuò)增產(chǎn)物彌散到空氣中，造成實(shí)驗(yàn)室氣溶膠污染。所以可以在-20℃冷卻5 min，或在4℃冷卻20 min再離心上樣。樣品上樣前需要加入上樣緩沖液，混勻后取適當(dāng)?shù)牧浚?-10微升）緩慢注入梳子孔中，由于上樣緩沖液的作用，我們可以清晰看見(jiàn)樣品注入的過(guò)程，與電泳過(guò)程中核酸移動(dòng)的距離。

③電泳。凝膠帶孔的一側(cè)放入負(fù)極一側(cè)，因?yàn)楹怂針悠酚韶?fù)極移動(dòng)向正極，負(fù)極一般用黑色表示。電泳槽倒入與凝膠相同的電泳緩沖液，確保電泳槽液面可以沒(méi)過(guò)凝膠表面。必須注意點(diǎn)樣開(kāi)始和完畢后盡量不要移動(dòng)電泳槽，以免造成樣品擴(kuò)散到電泳液中。點(diǎn)樣完畢后靜置2 min，如若樣品過(guò)多，需要加快點(diǎn)樣速度，避免先點(diǎn)的樣品擴(kuò)散，影響條帶結(jié)果。上述工作完成后蓋嚴(yán)電泳槽蓋，打開(kāi)電源，電壓設(shè)置120V左右，跑膠20-30 min即可。注意觀察凝膠上染料移動(dòng)位置，進(jìn)而減少或增加時(shí)間。

④結(jié)果判讀。取出凝膠放在切膠儀或凝膠成像分析儀上，用紫外燈照射觀察、拍照留存條帶結(jié)果。根據(jù)DNA Marker的條帶位置比照分析，得出目的條帶的位置（大?。?、亮度（數(shù)量）和非特異性擴(kuò)增（擴(kuò)增效果）。

結(jié)合上面的介紹，你有沒(méi)有存在日常操作中對(duì)小細(xì)節(jié)的疏忽呢？瓊脂糖凝膠電泳從制備、上樣、電泳和結(jié)果判讀，每一步環(huán)環(huán)相扣，一點(diǎn)點(diǎn)問(wèn)題都會(huì)體現(xiàn)在最終的結(jié)果上。在實(shí)驗(yàn)中為了更好的實(shí)驗(yàn)效果，遠(yuǎn)慕生物推出瓊脂糖、TAE速溶粉末，核酸染料，上樣緩沖液等全套瓊脂糖凝膠電泳所需試劑，更有含染料的Taq酶預(yù)混液，不用再去加上樣緩沖液啦！擴(kuò)增完成即可直接點(diǎn)樣，省時(shí)省力，避免污染！