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細(xì)胞培養(yǎng)的成敗關(guān)鍵在于無(wú)菌操作
點(diǎn)擊次數(shù):337 更新時(shí)間:2023-01-10

無(wú)菌操作是決定細(xì)胞培養(yǎng)成敗的關(guān)鍵因素,即便使用設(shè)備完善的實(shí)驗(yàn)室,若實(shí)驗(yàn)者粗心大意,操作不規(guī)范,也會(huì)導(dǎo)致污染。因此,所有操作都要最大可能的保證無(wú)菌,每一項(xiàng)工作都必須做到有條不紊和wan全可靠。

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1、實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前:在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前要制定好實(shí)驗(yàn)計(jì)劃和操作程序。有關(guān)數(shù)據(jù)的計(jì)算要事先做好。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求,準(zhǔn)備各種所需器材和物品、清點(diǎn)無(wú)誤后將其放置操作場(chǎng)所(培養(yǎng)室、超凈臺(tái))內(nèi),然后開(kāi)始消毒。這可以避免開(kāi)始實(shí)驗(yàn)后,因物品不全往返拿取而增加污染機(jī)會(huì)。

2、無(wú)菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞,必要物品,例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時(shí)放置,其它實(shí)驗(yàn)用品用完即應(yīng)移出,以利于氣流之流通。實(shí)驗(yàn)用品以70% ethanol 擦拭后才帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在抬面之中央無(wú)菌區(qū)域,勿在邊緣之非無(wú)菌區(qū)域操作。

3、 小心取用無(wú)菌之實(shí)驗(yàn)物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,亦不要在打開(kāi)之容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。容器打開(kāi)后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45°角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。

4、工作人員應(yīng)注意自身之安全,須穿戴實(shí)驗(yàn)衣及手套后才進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于來(lái)自人類(lèi)或是病毒感染之細(xì)胞株應(yīng)特別小心操作,并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)之無(wú)菌操作臺(tái)(至少Class II)。操作過(guò)程中,應(yīng)避免引起aerosol 之產(chǎn)生,小心毒性藥品,例如DMSO 及TPA 等,并避免尖銳針頭之傷害等。

5、定期檢測(cè)下列項(xiàng)目

(1)CO2 鋼瓶的CO2 壓力;(2) CO2 濃度、溫度、及水盤(pán)是否有污染(水盤(pán)的水用無(wú)菌水,每周更換); CO2 培養(yǎng)箱定期消毒;(3) 無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)氣流壓力是否正常,定期更換紫外線(xiàn)燈管及HEPA 過(guò)濾膜,預(yù)濾網(wǎng)(300 小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng),3000 小時(shí)/HEPA)。

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