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細(xì)胞株凍存和復(fù)蘇實驗詳細(xì)說明
點擊次數(shù):584 更新時間:2023-06-19

1. 細(xì)胞株取材要求新鮮,無菌,解剖小鼠時,注意不要損傷脾臟及其周圍的臟器,尤其是腸道等,防止污染脾臟。

2. 沖洗脾臟時要盡量洗凈血污,去除無用組織,并要防止組織干燥。

3. 碾磨后及時用清水沖洗篩網(wǎng),防止組織、細(xì)胞阻塞網(wǎng)孔。

4. 計數(shù)前,注意吸盡平皿里的細(xì)胞,充分混勻,使細(xì)胞分散成單個細(xì)胞。

5. 實驗操作應(yīng)在操作臺*無菌區(qū)域內(nèi)進(jìn)行,勿在邊緣非無菌區(qū)域操作。

6. 金屬器械不能在火焰中燒的時間過長,燒過的金屬鑷要待冷卻后才能挾取組織,以免造成組織損傷。

7. 另外膠塞過火焰時也不能時間長,以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體,危害培養(yǎng)細(xì)胞。

8. 吸取過營養(yǎng)液后的吸管不能再用火焰燒灼,因殘留在吸管頭中營養(yǎng)液能燒焦形成炭膜,再用時會把有害物帶入營養(yǎng)液中。

9. 不能用手觸及已消毒器皿瓶口、瓶塞內(nèi)部,吸管前部等所有可能與細(xì)胞接觸的部分,如已接觸,要用火焰燒灼消毒或取備品更換。

10. 開啟、關(guān)閉長有細(xì)胞的培養(yǎng)瓶時,火焰滅菌時間要短。細(xì)胞株防止因溫度過高燒死細(xì)胞。

11. 換液時傾倒廢液,瓶口不能接觸廢液缸,速度不能過快,防止廢液四濺。

12. 吹打細(xì)胞時,要注意邊角的細(xì)胞是否吹打下來。

13. 手或相對較臟的物品不能經(jīng)過開放的瓶口上,即不可以在開放容器上方操作。

14. 每次操作只處理一株細(xì)胞,以免造成細(xì)胞交叉污染。

15. 注意自身的安全,對于來自人源性或病毒感染的細(xì)胞株應(yīng)特別小心。操作過程中,應(yīng)避免引起氣溶膠的產(chǎn)生,小心有毒性試劑例如DMSO,并避免尖銳物品傷人等。

16. 從增殖期到形成致密的單層細(xì)胞以前的培養(yǎng)細(xì)胞都可以用于凍存,但為對數(shù)生長期細(xì)胞。在凍存前一天換一次培養(yǎng)液。

17. 將凍存管放入液氮容器或從中取出時,要做好防護(hù)工作,以免凍傷。

18. 細(xì)胞株凍存和復(fù)蘇用新配制的培養(yǎng)液。

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