實(shí)驗(yàn)方法原理 | 彈力纖維由隨機(jī)交聯(lián)盤繞的一些肽鏈組成,含有豐富的二硫鍵糖蛋白成分,所以可稱為彈性蛋白。易與染色液中堿基結(jié)合,為了能夠更好地顯示彈力纖維和膠原纖維成分,選用維多利亞藍(lán)、麗春紅和ku味酸組合雙重染色方法。 |
實(shí)驗(yàn)材料 | 石蠟組織切片 |
試劑、試劑盒 | 維多利亞藍(lán) 糊精 間ben二酚 蒸餾水 乙醇 三氯化鐵水溶液 濃鹽酸 ben酚二甲苯 中性樹膠 |
儀器、耗材 | 60 ℃恒溫箱 濾紙 |
實(shí)驗(yàn)步驟 | 維多利亞藍(lán)染色液:維多利亞藍(lán)(Victoria blue)2 g,糊精 0.5 g,間ben二酚 4 g,蒸餾水 200 ml。將上述物質(zhì)混合后加熱煮沸,邊煮邊攪拌,約 5min。然后用另一容器取 30% 三氯化鐵水溶液 25 ml,另行加熱煮沸后慢慢倒入上述混合液中,繼續(xù)煮沸 3 min,不斷攪拌溶液呈膠凍狀。去火,冷卻過濾,將濾紙上的殘?jiān)B同濾紙一起放在 60℃ 恒溫箱中烤干。殘?jiān)噬钏{(lán)色細(xì)顆粒狀粉末,再將其溶于 400 ml 的 70% 乙醇液中。然后加濃鹽酸 4 ml 和苯ben酚 5 g,放置至成熟后使用。
1. 石蠟組織切片,常規(guī)脫蠟至水。
2. 切片入 70% 乙醇中洗 2 min。
3. 將切片浸入盛有維多利亞藍(lán)液中染 2~5 h。
4. 直接入 95% 乙醇中分色數(shù)秒鐘。
5. 用蒸餾水洗 2 min。
6. 用麗春紅-ku味酸染色液滴染切片 3 min。
7. 直接用無水乙醇沖洗多余染色液 2 次。
8. 二甲苯透明和中性樹膠封固。 |
注意事項(xiàng) |
1. 維多利亞藍(lán)染色液可在室溫中存放較長時(shí)間,染色液浸染后倒回原處,可反復(fù)使用。
2. 95% 乙醇分色后,立即浸入水中,可用顯微鏡觀察染色程度,如果較淺或較深,可再重復(fù)染色或分色。 |
其他 | 結(jié)果:彈力纖維呈藍(lán)綠色,膠原纖維呈紅色,背景呈黃色。 |