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    產品中文名：人血管生成素2（ANG-2）ELISA試劑盒

    別名：人血管生成素2（ANG-2）ELISA Kit

    供貨商：上海遠慕

    規(guī)格：96T/48T

    保存：2-8℃

    試劑盒成分：酶標板，試劑，標準品等

    樣本：血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。

    預期應用：ELISA法定量測定血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清或其它相關生物液體中的含量。

    Elisa試劑盒特點：靈敏性高、特異性強、重復性好。

    應用領域：僅供科研使用，不得用于醫(yī)學診斷

    檢測目的：用于測定血清，血漿及相關液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標本

    操作步驟：

    1. 編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2 孔、陽性對照2 孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）。

    2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

    3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

    4. 配液：將20倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用。

    5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復5次，拍干。

    6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

    7. 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘。

    8. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

    9. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

    人血管生成素2（ANG-2）ELISA檢測試劑盒檢測中樣品的處理

    1.細胞培養(yǎng)物上清：

    細胞培養(yǎng)物于室溫1000g，離心10分鐘后收集上清，并將標本保存于-20℃，且應避免反復凍融。

    2.血清：

    標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g，4℃離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

    3.血漿：

    可用EDTA或肝素作為抗凝劑標本采集后30分鐘內于2-8℃，1000g離心15分鐘，或將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

    4.尿液：

    無菌收集取初尿，離心除去沉淀物，即可用于檢測，要長期保存尿樣，可以加入0.05％的NaN3在4-8℃保存，或加入尿樣冰凍保護液放入-20℃冰箱長期保存。

    5.組織勻漿：

    將組織標本先用PBS洗滌，除去多余血液，勻漿化后放在PBS于-20℃放置過夜，再經過二次反復凍融破膜，5000g，4℃離心5分鐘，取上清即可檢測。

    操作常見問題解析：

    1.加樣？

    在現(xiàn)在的ELISA商品試劑盒中，必然有使用微量加樣器加入樣本的步驟。注意的關鍵點是：加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產生氣泡。加樣太快，無法保證微量加樣的準確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導致非特異吸附。濺出會對鄰近孔產生污染。出現(xiàn)氣泡則反應液界面有差異。所以，有時候一份標本用相同的試劑盒這次測定為陽性，下次測定為陰性，往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致。

    2.邊緣效應

    使用96孔板的ELISA測定中，常發(fā)現(xiàn)有“邊緣效應"，即外周孔顯色較中心孔深。經研究證實在溫育中的熱力學梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身為不良熱導體，在實驗室的常規(guī)ELISA測定中，將板從室溫（通常在25℃左右）置于37℃溫箱，板也升溫時，在外周孔與中心孔之間可能存在一熱力學梯度。因此使用水浴或在將反應溶液加入至板孔中時，將板和溶液均加熱至溫育溫度（如37℃），就可以很容易地排除“邊緣效應"，并且可提高測定的重復性。

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